谷草转氨酶活性检测试剂盒（货号：AKAM）
转氨酶是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶，普遍存在于动物、植物组织和微生物中，谷草转氨酶（GOT）主要催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸之间的转氨作用，是氨基酸代谢的重要酶，在心肌细胞中含量最高，临床上常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查指标，肝细胞或某些组织损伤或坏死，转氨酶也会释放到血液中使谷草转氨酶升高，在一些疾病的诊断方面具有重要意义。
谷草转氨酶催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸，丙酮酸能够与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下呈棕红色，产物在nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可表征谷草转氨酶的活性。
谷草转氨酶活性检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率20%或W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃g离心10min，取上清置于冰上待测。
③血清（浆）、培养液等液体样本：直接检测或适当稀释后再进行检测。
吸光值测定：取1mL反应液于1mL玻璃比色皿中，测定nm处吸光值，记为A测定、A对照、A标准和A空白；计算A测定=A测定-A对照，A标准=A标准-A空白。注：空白管只需测定1-2次，每个测定管均需设一个对照管。
标准曲线的建立：以1.6、0.8、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL为横坐标（x），以其对应的A标准为纵坐标（y），绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将A测定带入公式中得到x（μmol/mL）。
注意事项
①若ΔA测定超出标准线性吸光范围，建议适当增加样本（低于标准下限）或将粗酶液适当稀释后（高于标准上限）再进行测定，计算时相应修改；
②为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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